羅列影響實(shí)驗(yàn)室顯微鏡成像的重要因素
將微小物體或物體的微細(xì)部分高倍放大,以便觀察的儀器或設(shè)備。它廣泛應(yīng)用于工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)及科學(xué)研究。生物學(xué)和醫(yī)學(xué)工作者在業(yè)務(wù)中也經(jīng)常使用顯微鏡。大致分為光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡。
光學(xué)顯微鏡成像原理:使用無(wú)限遠(yuǎn)光學(xué)系統(tǒng)的顯微鏡主要由物鏡、管鏡和目鏡組成。標(biāo)本經(jīng)物鏡和管鏡放大后,形成放大倒立的實(shí)象;實(shí)象經(jīng)目鏡再次放大后,形成放大的虛象。 標(biāo)本(AB)在物鏡(Lo)焦點(diǎn)上,通過(guò)物鏡(Lo)和管鏡(Le)在象方形成放大倒立的實(shí)象(A’B’);靠近人眼一方的目鏡(Le)對(duì)中間象(A’B’)再次放大,在明視距離(對(duì)人眼來(lái)說(shuō)約為250mm)處形成一個(gè)虛象(A”B”)。 人眼通過(guò)顯微鏡所觀察到的象就是一個(gè)被放大了的虛象A”B”。
電子顯微鏡成像原理:電子顯微鏡是根據(jù)電子光學(xué)原理,用電子束和電子透鏡代替光束和光學(xué)透鏡,使物質(zhì)的細(xì)微結(jié)構(gòu)在非常高的放大倍數(shù)下成像的儀器。電子顯微鏡的分辨能力以它所能分辨的相鄰兩點(diǎn)的最小間距來(lái)表示。20世紀(jì)70年代,透射式電子顯微鏡的分辨率約為0.3納米(人眼的分辨本領(lǐng)約為0.1毫米)?,F(xiàn)在電子顯微鏡最大放大倍率超過(guò)300萬(wàn)倍,而光學(xué)顯微鏡的最大放大倍率約為2000 倍,所以通過(guò)電子顯微鏡就能直接觀察到某些重金屬的原子和晶體中排列整齊的原子點(diǎn)陣。影響實(shí)驗(yàn)室顯微鏡成像的重要因素有:
1、使用顯微鏡時(shí),被檢物體做的較標(biāo)準(zhǔn)很重要。如:切片厚度是否太厚,蓋玻片是否符合國(guó)標(biāo)等。
2、顯微鏡物鏡按檔次可分為約6-8個(gè)檔,最常用的為平場(chǎng)消色差物鏡。如鏡頭檔次太低,則成像質(zhì)量會(huì)下降。因此,建議選擇平場(chǎng)以上檔次物鏡。
3、聚光鏡孔徑光欄,盡量和物鏡的數(shù)值孔徑相符。才能得到最佳的圖像分辨率。
4、調(diào)焦系統(tǒng)作為機(jī)械部分的重要部件,調(diào)焦精度也非常重要。對(duì)于生物學(xué)初學(xué)者或剛接觸顯微鏡的操作者,熟練的使用調(diào)焦系統(tǒng),能快速找到圖像并聚焦,提高工作效率。
5、載物臺(tái)在觀察切片時(shí),常做X,Y的移動(dòng)。如:雙層的機(jī)械移動(dòng)平臺(tái),精度和穩(wěn)定性較好,能在觀察顯微圖像時(shí)提供好的成像質(zhì)量。
6、非球面集光鏡能提供非常均勻的照明光線,所觀察到的顯微圖像襯度極佳。
7、視場(chǎng)光欄應(yīng)根據(jù)觀察不同的被檢物體和物鏡倍率開(kāi)啟到合適的位置,如開(kāi)得過(guò)大或過(guò)小顯微圖像的視場(chǎng)亮度會(huì)受到影響。
8、照明系統(tǒng)如采用溫度低,色溫較高的照明裝置,觀察到的是分辨率和銳利度極高的顯微圖像。
9、采用柯拉照明系統(tǒng),能調(diào)節(jié)光學(xué)的中心像??蒲屑?jí)的顯微鏡均采用此系統(tǒng),為鏡檢和專業(yè)數(shù)碼顯微成像系統(tǒng),提供優(yōu)質(zhì)的顯微照片。