基因擴(kuò)增儀工作原理與不同類(lèi)型應(yīng)用領(lǐng)域
PCR儀即基因擴(kuò)增儀,主要是利用DNA聚合酶對(duì)特定基因做體外或試管內(nèi)In Vitro的大量合成,用DNA聚合酶進(jìn)行專(zhuān)一性的連鎖復(fù)制。其原理為利用升溫使DNA變性,用限制性?xún)?nèi)切酶使DNA雙鏈解鏈,在聚合酶的作用下使單鏈復(fù)制成雙鏈,進(jìn)而達(dá)到基因復(fù)制的目的。
PCR儀的反應(yīng),主要是先將DNA加熱變性, 將雙股的DNA加熱后轉(zhuǎn)為單股DNA以做為復(fù)制的模板。 再將Primers冷卻至55~60℃,附著于模板DNA兩端,最后在DNA聚合酶e.g. Taq-polymerase 的作用下加熱,進(jìn)行引物的延長(zhǎng)及DNA的合成。
PCR儀目前按照擴(kuò)增的目的和檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn),主要分為普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR儀,實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀等。普通PCR儀要做不同的退火溫度需要多次運(yùn)行,梯度PCR儀可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度),通常有12種溫度梯度進(jìn)行擴(kuò)增。原位PCR儀用于從細(xì)胞內(nèi)靶DNA的定位分析的細(xì)胞內(nèi)基因擴(kuò)增儀。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀增加一個(gè)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng),擴(kuò)增的結(jié)果通過(guò)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)實(shí)時(shí)采集信號(hào)連接輸送到計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)得出量化的實(shí)時(shí)結(jié)果輸出。
PCR技術(shù)被廣泛地應(yīng)用于生命科學(xué)研究、食品衛(wèi)生、醫(yī)療、法醫(yī)及環(huán)境監(jiān)測(cè)等諸多方面,包括科研、臨床、用戶(hù)試劑、進(jìn)口試劑、定性或定量等各種條件要求的PCR實(shí)驗(yàn)。